测序样品的提供
质粒DNA的测序
Sample形态为提纯质粒时
请注明载体名称及结构情况、插入片段的长度及插入片段的酶切位点等情况。请提供3～5ug提纯的质粒DNA（浓度大于200ng/ul）。如果提供质粒偏烧学要公司转化时，收取质粒转化费用
Sample形态为含有质粒的菌体时
请注明菌体的种类及抗生素抗性的情况。所含载体的名称及结构情况、插入片段的长度及插入片段的酶切位点等情况。对于一般的质粒、本公司免费提纯质粒后进行DNA测序。如果提供的菌体需特殊培养，或质粒的拷贝数较低时，收费标准视具体情况而定。
PCR产物直接测序
- Sample形态为纯化后的PCR产物时
请提供切胶回收纯化后的PCR产物1～3（浓度大于100ug/ul），并请提供浓度（浓度须正确）大于3.2pmol/ul的测序引物20ul以上。此外，庆祝名PCR产物的长度、引物的具体序列情况。 - Sample形态为未纯化的PCR产物时
请提供5～20ug的粗PCR产物，我们负责纯化测序（收取纯化费）。同时请提供浓度（浓度须正确）大于3.2pmol/ul的测序引物20ul以上，并注明PCR产物的长度、引物的具体序列等情况。 - Sample形态未PCR模板DNA时
请提供适量的模板DNA及踊跃图PCR的引物（浓度大于3.2pmol/ul约100ul）。本公司负责PCR反应和PCR产物的纯化及测序（需收取PCR反应费及PCR产物的纯化费）。此外，请注明PCR产物的长度及引物的具体序列等情况。
注意事项
- PCR产物直接测序成功的关键时PCR产物的纯度，所以我们提倡切胶回收PCR产物。如果有几条PCR产物长度相近，永电泳胶也无法分开，此时的PCR产物便无法直接测序。这种情况建议把PCR产物克隆后测序。
- PCR产物直接测序成功的另一要因时引物，不是能做PCR反应的引物便能测序。测序永引物要求较高，引物的3’端必须与模板完全匹配，含有Mix碱基的引物一般不能测序（特别是3’端）此外，测序引物长度一般为20个碱基左右，GC含量必须在50～60％左右。而且，用于测序的引物一定要纯，纯度必须大于90％。
- 在PCR扩增时，难以扩增（扩增后的PCR带较弱）的PCR产物在测序时一般成功效率较低。
- 小于150bp的PCR产物直接测序效果不好，请克隆后测序。
Cosmid中插入DNA片段的测序
请提供纯化的Cosmid DNA大于5ug（因每个反应的永良需1ug以上）。DNA必须注明浓度，并请提供浓度（浓度须正确）大于5pmol/ul的引物10ul以上。此时每个反应的收费标准为500元。
其他说明
客户在提供测序样品的同时，请注明永可中引物。测几个反应，是否测通，是单链测序（Single stand reading）,还是双链测序（Double strands reading）等。
测序引物的说明
客户自备引物的说明
提供引物的序列，需要我们合成是，按DNA 合成服务收费
自备引物时，，请提供浓度（浓度须正确）大于3.2pmol/ul的引物20ul以上，并注明引物序列。
注意引物长度适宜在20个碱基左右，GC含量在50～60％左右。不要使用含有Mix碱基的引物，特别在3’端的3个碱基内不能含有Mix碱基。引物纯度必须大于90％
本公司免费提供的测序用引物
M13（+），M13(+),T7 promoter,T7terminator,SP6 pGEX 3’P,Pgex 5’P,Pbv220 3’P,pBV220 5’P,AOX 3’P,AOr×3’P AO×5’P,BGH rev,PCIT7,pACT2-F,Pact-2R,pCMV-R,pGAD3’p,pGL-3F,pGL3-R,pLXSN-F,pLXSN-R,pQE30PF,pQE30PR,pEGFP-CF,pEGFP-CR,pEGFP-NF,pEGFP-NR等
测序结果说明
测序结果
●测序完成后，我们用E-mail给客户发送序列，并用EMS提供以下资料。对每个Sample提供一份测序报告，其中有测序操作情况，测序方向（同一样品进行两个以上反应时）常用酶切位点图，测出具体序列图，彩色波形图等。
●在进行DNA测序时，紧接引物的10～30 Bases有时不一定能完全读清楚。
●由于DNA结构上的原因，有时会出现反应中途无法进行之情况。如：G/C rich; G/C Cluster;Poly A Poly T的连续结构等。此外，另一种情况为反应中途出现的套峰现象，此种情况一般为FDNA结构种的重复序列，造成测序用引物和模板质检有一个以上的结合点。
以上情况时由于DNA结构原因造成可无法正常进行DNA测序，对这种情况，我们会根据具体测序结果进行相应收费，出现以上情况后，我们提倡从另一方向进行测序。
备注说明
●一般的质粒从收到样品日至发货日时间为三天。如果Sample形态为菌体或样品需要转化时，应多加2天时间，对于三个工作日内无法得到测序结果的，我们会用E－mail或电话，转真等及时与客户或代理商联系。
●并不时所有的样品都能得到满意的测序结果，对于测序结果不好的，我们会尽力赵到可能的原因，以建议进一步如何操作。
大片段DNA的测序
■鸟枪法(Shot Gun Sequencing)测序
●鸟枪法测序的操作方法
1.用限制酶切下目的片段的大片段Insert DNA，并且Agarose凝胶电泳进行回收。
2.对回收的大片段DNA用物理方法（如超声波等）进行切断处理，然后用T4 DNA Polymerase对笑片段DNA进行末端平滑化。
3.进行Agarose电泳，切胶回收1 kbp～2kbp的笑片段DNA。然后用BcaBest DNA Polymerase
在DNA的3’端加上一个A碱基
4.把加上A－tail的DNA片段炼乳T－Vector种，然后转化，挑选克隆
5.对阳性克隆（含1kbp～2kbp Insert）进行DNA测序。
6.对数据进行编辑，最后连成一条大片段的DNA系列。
●DNA测序量
应该进行的DNA测序量以DNA片段实际长度的4倍量进行计算，对每个反应的有效测序长度定义为400Bases。
如：对10kbp的DNA片段进行测序时，可以按以下方法进行计算：
测序量＝10.000Bases×4/400Bases＝100个反应
●结果编辑
按上序所示的DNA测序量要求进行DNA测序，然后对其所有结果进行编辑。此时的测序结果会连接成数个DNA大片段（Contig）
●补缺工作
结果编辑工作结束后，会发现在数个DNA大片段（Contig）间的序列没有测定，此时应该进一步通过技术手段，解析那些没有被解明的DNA序列，进行整体DNA序列的补缺工作。
●收费标准
1.DNA文库构建费用：3.000元/文库
2.DNA测序费用见下表。
3.补缺费用;1元/Base（含DNA测序费，引物合成费，克隆费，PCR反应费等）。合计费用：上述的1+2+3的总计费用为鸟枪法测序的合计费用。
●其他说明
1.病毒DNA种，特别时病毒DNA的两端经常会有大片段的DNA重复序列出现，可能无法测序，请谅解。
2.DNA序列种，有时会有G.A.C.T的连续结构，G/C rich等复杂的立体结构出现，此部分有可能无法测序，请谅解。
限制酶切，亚克隆测序法
●测序方法
由于鸟枪法测序会出现较多的重复测序结果，因此，小于100kbp的DNA片段测序工作使用鸟枪法测序价格太昂贵，此时比较适合与使用限制酶切，亚克隆测序法。
限制酶切，亚克隆测序法的方法如下：
1.选择适当的限制酶，对Insert DNA片段进行切断处理。
2.对切断的DNA片段进行亚克隆。
3.对每个亚克隆种的DNA片段进行测序。
4.编辑测序结果。
5.整体序列如有空缺，进行补缺工作
●收费标准
0.8元/Bases（含DNA测序，引物合成，克隆，PCR等全部费用）
●其他说明
1.病毒DNA，特别时病毒DNA的两端经常会有大片段的DNA重复序列出现，可能无法测序，请谅解。
2.DNA序列种，有时会有G.A.C.T的连续结构，G/C rich等复杂的立体结构出现，此部分有可能无法测序，请谅解。